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CFDA, SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針檢測原理與注意事項

更新時間:2025-01-08      點擊次數(shù):31

CFDA-SE可用于細(xì)胞示蹤,也可用于細(xì)胞增殖檢測。經(jīng)CFDA-SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,且具有不會使鄰近細(xì)胞染色的功能。CFDA-SE常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測,也可用于成纖維細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞,造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測。

檢測原理

CFDA SE可以通過完好的細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶催化分解成CFSE。CFSE可以隨機(jī)地、不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的賴氨酸殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng),并標(biāo)記這些蛋白,CFDA-SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光。CFDA-SE標(biāo)記的分裂細(xì)胞每分裂一次,子代細(xì)胞的熒光會減弱一半,分裂一次的細(xì)胞熒光強(qiáng)度減半(1/2),分離兩次的細(xì)胞熒光強(qiáng)度再減半(1/4),以此類推,熒光強(qiáng)度按照1/2,1/4,1/8,1/16的規(guī)律逐漸遞減。

使用方法

1、保存液配制(5 mM)

   按需配制,如取DMSO 360 μL,溶解1 mg CFSE,超音波溶解,得到5 mM CFSE保存液,將其按40 μL體積分裝于避光的無菌凍存管中,-20℃可保存2個月。

2、工作液配制

   取 5mM 的CFSE稀釋液1μL,加入1mL10%FCS的PBS稀釋。

3、染色

   (1) 重懸細(xì)胞。用有5% FCS的PBS重懸細(xì)胞,細(xì)胞濃度一般為1x1x10^6/mL(體外實驗)或1x1x10^7/mL(轉(zhuǎn)染實驗)。

   (2) 染色。1mL DFSE工作液與1mL細(xì)胞懸液混合后37℃孵育5~10 min。期間輕輕混勻2次。

   (3) 終止染色。用完培養(yǎng)液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5 min后進(jìn)行第3次洗滌。冰冷的含10% 新生牛血清、RPMI-1640 medium(含L-谷氨酰胺)(貨號:AC01L064),輕輕混勻1 min(用手輕彈,切忌吹打),1500 r/min 離心5 min。

(4) 流式細(xì)胞儀在FL1通道檢測。

注意事項

 ? 所有試劑在使用前均需解凍、混勻,混勻過程中盡量避免產(chǎn)生氣泡;CFDA SE溶劑在較低溫度下會凝固,請于20-25℃水浴片刻至全部融化后再使用。

 ? 試劑中含有熒光染料,保存或進(jìn)行標(biāo)記時盡量避光操作,以避免熒光淬滅問題。

 ? 不同細(xì)胞的內(nèi)酯酶活性不同,因此染色效果具有差異性。可根據(jù)細(xì)胞類型及培養(yǎng)條件摸索最佳工作濃度。

 ? 若需要對細(xì)胞進(jìn)行固定,請用醛類固定劑如3.7%多聚甲醛于室溫固定15 min;之后若還需要進(jìn)行其他如抗體標(biāo)記,請用冰丙酮透化處理細(xì)胞10min。

 ? 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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